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十株野生猴头菌菌株的栽培性状及麦角甾醇含量

摘要 考查采自黑龙江省不同地区的10个猴头菌(Hericium erinaceus)野生菌株的液体培养性状和栽培农艺性状,同时测定了菌丝体、子实体中麦角甾醇含量,为猴头菌育种筛选亲本材料。结果表明:液体培养中,5号和10号菌株菌丝产量较高,分别为2.23 g/100 mL、2.39 g/100 m
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时时彩平台哪个好 www.1otf.com.cn   摘要 考查采自黑龙江省不同地区的10个猴头菌(Hericium erinaceus)野生菌株的液体培养性状和栽培农艺性状,同时测定了菌丝体、子实体中麦角甾醇含量,为猴头菌育种筛选亲本材料。结果表明:液体培养中,5号和10号菌株菌丝产量较高,分别为2.23 g/100 mL、2.39 g/100 mL,麦角甾醇含量分别为0.92 mg/g、0.90 mg/g;栽培中,5号和10号菌株子实体产量高,菇型圆整、商品性状好;4、6和9号菌株子实体中麦角甾醇含量相对较高。
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  关键词 猴头菌; 野生菌株; 菌丝体; 子实体; 麦角甾醇
  猴头菌(Hericium erinaceus) 分类学上隶属担子菌门(Basidiomycota)、猴头菌科(Hericiaceae)、猴头菌属(Hericium),是我国著名的食药兼用真菌。猴头菌味道鲜美,营养丰富,被誉为“山珍”,在《中华本草》中猴头菌属于菌类植物药,子实体和固体发酵菌丝体均可入药,性平,味甘,有利五脏、助消化、滋补、抗癌等功能[1],尤其对胃黏膜具有极好的?;ぷ饔肹2]。目前我国有100多个以猴头菌为主要原料的用于胃肠疾病治疗的准字号药品[3],其中猴头菌片、猴头健胃灵、复方猴头颗粒等被列为国家中药?;て分?。
  猴头菌有效成分主要有多糖、寡糖、甾醇类、萜类、猴头菌素、猴头菌酮等物质[4],其中麦角甾醇具有降胆固醇、抗炎、抗癌、预防心血管疾病、防治前列腺疾病、抗氧化延缓衰老等作用[5-7]。TAKAISHI [8]、李洁莉[9]、陈宇 [10]、张鹏[11]等从猴头菌菌丝和子实体中均分离到麦角甾醇等多种甾体化合物。在猴头菌的发酵培养和栽培中,菌种是菌丝和子实体产量以及活性物质含量的决定性因素,李迎雪等报道不同菌株之间麦角甾醇的含量存在显著差异[12]。
  笔者选用从黑龙江省不同地区采集的10个野生猴头菌菌株,通过液体培养、固体栽培,考查不同菌株的菌丝生长量及子实体商品性状和产量,比较不同菌株菌丝体和子实体麦角甾醇的含量,以期为猴头菌栽培菌株或麦角甾醇高产菌株育种提供亲本资源。
  1 材料与方法
  1.1供试菌株
  供试10个猴头菌(H. erinaceus)均为采自黑龙江省不同地区野生子实体的分离菌株,猴头菌野生标本由东北林业大学潘学仁教授鉴定,菌种由黑龙江省科学院微生物研究所菌种保藏中心保存,菌种编号及来源见表1。
  1.2仪器与试剂
  Waters 600型高效液相色谱仪(配Waters 2487紫外-可见检测器、Waters717 自动进样器与Empower 色谱工作站, 美国Waters 公司);色谱柱XT erra MS C18 (4.6 mm × 250 mm,5 μm);麦角甾醇标准品(购于阿尔法公司,纯度为96%);甲醇为色谱纯,水为超纯水,其它试剂均为分析纯。
  1.3培养基质
  液体发酵培养基:2%麦芽糖,1%蛋白胨,0.15%磷酸二氢钾,0.15%硫酸镁。
  原种、栽培种培养料:79%阔叶杂木屑,20%麸皮,1%石膏,含水量65%左右。
  1.4液体培养
  10块0.4 cm×0.4 cm活化斜面菌种接种于装有100 mL液体培养基的250 mL三角瓶中,每个菌株4个重复。25 ℃下静置培养2 d后,150 r/min振荡培养6 d。发酵液过滤,收集菌丝体,60 ℃干燥至恒重,称重,研钵研碎,过30目筛备用。
  1.5栽培方法
  1.5.1原种制备
  500 mL菌种瓶装湿料400 g(约合干料140 g),每支斜面母种(20 mm×200 mm)接6瓶,25 ℃恒温培养25~30 d。
  1.5.2栽培种制备
  17 cm×33 cm聚丙烯袋,每袋装湿料1.0 kg(合干料350 g),120 ℃高压灭菌2 h。料温冷却至30 ℃以下,每袋接种原种约20 g,每个菌株接种100袋。23~25 ℃,空气相对湿度50%以下,避光培养约40 d满袋。
  1.5.3出菇管理
  菌丝满袋后移入菇房,立放在出菇床架上出菇[13]。子实体成熟的标准:直径达到10 cm左右,菌刺粗壮,长度1.0 cm左右,子实体洁白,球块肉质坚实,未弹射孢子。
  戴肖东,等:十株野生猴头菌菌株的栽培性状及麦角甾醇含量
  1.6采样期筛选
  以1号、3号、4号猴头菌菌株为研究对象,分别于菇蕾形成期、中刺期、成熟期和成熟后期4个生长发育期采集子实体,测定不同生长期子实体中麦角甾醇含量变化。不同时期子实体特征如表2。
  1.7测定项目及方法
  于麦角甾醇含量高的生长发育期采集子实体,称重,测算产量和转化率;测量子实体的大小、形态,评价菌株的栽培性状。子实体样品,60 ℃烘干,研磨成粉末,过30目筛,用以测定麦角甾醇含量。参照李迎雪等[12] 方法制备麦角甾醇标准品溶液。
  分别准确称取猴头菌子实体和菌丝体干粉0.1 g,加5 mL无水乙醇浸提过夜,超声波频率40 kHz,温度35 ℃,处理40 min,经0.45 μm滤膜(上海昨非公司)过滤,即得供试样品。
  利用高效液相色谱法测定样品中麦角甾醇的含量,在进行HPLC分析时以含量为96%麦角甾醇为标准品,流动相为甲醇-水(98∶2,v∶v);流速为1.0 mL/min;柱温25 ℃;检测波长284 nm;进样量20 μL;检测灵敏度0.01 AUFS。
  2 结果与分析
  2.1麦角甾醇HPLC色谱图
  HPLC分析表明,6组不同浓度麦角甾醇标准品的出峰时间为15.78~15.85 min之间,在0~612 μg/mL之间有良好的线性关系,回归方程为: Y=13506X-8965.7,r=0.9999(X标准品浓度,Y峰面积)。样品的麦角甾醇出峰时间为15.80~15.86 min,与标准品基本一致,峰形较好(图1)。   2.2不同菌株菌丝生长量及麦角甾醇含量
  10个猴头菌菌株液体发酵菌丝产量差异显著(表3)。在10个菌株中,5号和10号菌丝生长量相对较高,其次为1号、2号、3号和4号,而8号菌株菌丝产量最低,仅为0.86 g。在实验培养条件下,5号和10号菌株较其他菌株易于培养,菌丝产量有明显的优势。
  10个猴头菌菌株菌丝样品中麦角甾醇的含量在0.90~1.33 mg/g。8号菌株麦角甾醇含量高,为1.33 mg/g。其他供试菌株菌丝体中麦角甾醇的含量没有显著差异。从菌丝产量和甾醇含量两个方面对菌株综合评价,5号和10号具有明显的优势,可以作为液体培养的首选菌株。
  2.3子实体不同生长阶段麦角甾醇含量
  3个测试菌株,在子实体分化至成熟阶段,麦角甾醇含量呈上升趋势,当子实体成熟时麦角甾醇的含量达到最大值,子实体成熟后麦角甾醇合成降低(图2)。因而,猴头菌应于成熟期适时采收。
  2.4不同菌株子实体性状、产量及麦角甾醇含量
  不同菌株栽培性状及子实体产量如表4。栽培过程中,10个菌株有8个能产生子实体,并有一定的产量,2号和8号菌株在试验条件下没有子实体产生。产量方面,5号、7号和10号相对较高;从子实体性状看,1号、5号和10号为单体,呈圆球型,菌肉致密,单球重,有较好商品性;4号和7号虽为圆球形,但多体聚生,商品性稍差;3号、6号和9号菌株子实体形状不规则,呈菜花状。综合比较,5号和10号菇形好,产量相对较高,可作为选育栽培用菌株的亲本材料。
  产生子实体的8个菌株中,子实体麦角甾醇含量差异较大。4号、6号和9号菌株合成甾醇能力相对较强,子实体中麦角甾醇含量相对较高,分别为2.58 mg/g、2.72 mg/g、2.45 mg/g;3号、5号、7号和10号菌株麦角甾醇的合成能力相对较弱。
  3 讨论
  猴头菌的营养和药用价值得到广大消费者的认可,也已经成为治疗胃肠疾病的常用药物原料。猴头菌的利用主要以野生或木屑栽培的子实体为主,由于生长受到季节、栽培技术、栽培品种等条件的限制,猴头菌产量相对较小,子实体多用于食用,而利用子实体进行保健食品和药品开发的成本相对较高。菌丝的固体和液体深层发酵具有生产周期短、菌丝生长速度快、节约资源、成本低等优势,不受季节的限制,可以周年生产,利用菌丝培养物进行成分提取已经广泛应用于猴头菌的药物生产,如猴头菇片、胃乐宁、猴头菌提取物颗粒等[1]。高产、优质、抗逆、适应性强的优良品种的选育一直是食用菌生产中提高产量和品质的基础,在针对猴头菌活性物质及药用成分特异性菌株的筛选方面工作也取得一定进展[14-15]。
  本研究中,对从黑龙江省不同地区采集分离的10个野生猴头菌菌株进行综合比较,5号和10号两个菌株菌丝生长能力强,产量明显高于其它菌株,可作为液体培养育种的首选亲本菌株;栽培过程中,5号和10号菌株子实体产量高且菇型好,亦可作为商品栽培育种亲本菌株;4号、6号和9号菌株麦角甾醇代谢能力较强,子实体中麦角甾醇含量较高,可作为药用栽培育种亲本菌株。
  参考文献
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